背景介紹

Caco2細(xì)胞是常見的結(jié)腸腺癌細(xì)胞，正常情況下，Caco2細(xì)胞在培養(yǎng)的過程中貼壁生長，其形狀多為多邊形或梭形，增殖速度較快，其鏡下形態(tài)如下圖所示，密度已大于90%?？梢赃M行傳代。

培養(yǎng)方法：

1.培養(yǎng)基配置：DMEM高糖培養(yǎng)基 + 10%胎牛血清 + 1%青霉素鏈霉素雙抗 + 1%谷氨酰胺。

2.其余需要準(zhǔn)備的試劑耗材包括：無菌PBS、腺酶、無菌槍頭、細(xì)胞培養(yǎng)皿、15ml離心管、離心機、生物安全柜、水浴鍋、75%酒精。

3.培養(yǎng)條件：37°C、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱；

4.細(xì)胞復(fù)蘇：提前將水浴鍋溫度調(diào)至37°C，從液氮罐中拿出細(xì)胞，迅速放在37°C水浴鍋中輕輕晃動，使細(xì)胞快速融化，融化后用移液器輕輕混勻，將其轉(zhuǎn)移到15ml離心管內(nèi)，加入1-2ml培養(yǎng)基，室溫800rpm離心5min，去上清后加入1ml培養(yǎng)基重懸10次左右，將其全部加入6cm細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)（提前加入4-6ml培養(yǎng)基），十字混勻后放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中，24h觀察細(xì)胞密度進行后續(xù)操作。

5.細(xì)胞傳代：當(dāng)細(xì)胞密度≥90%時，進行細(xì)胞傳代，吸掉原有培養(yǎng)基，沿培養(yǎng)皿邊緣加入1ml PBS清洗，吸掉PBS后加入750μl含EDTA的胰酶消化，消化時間2min左右，消化完成后加入1.5ml培養(yǎng)基中止消化，用移液槍吹打，保證細(xì)胞全部被吹下，將混合液全部轉(zhuǎn)移到離心管中，室溫800rpm離心5min，去上清后加入1ml培養(yǎng)基充分重懸，取333μl加入有4ml培養(yǎng)基的6cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，十字混勻后放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)，1-3天后根據(jù)細(xì)胞密度換液或傳代。

6.細(xì)胞凍存：前述收集細(xì)胞沉淀，加入1ml凍存液（培養(yǎng)基：FBS：DMSO=7：2：1）充分重懸，將混合液移入凍存管內(nèi)，標(biāo)記好基本信息，將凍存管入凍存盒后放入-80℃冰箱，24h后可將凍存管放入-80℃冰箱細(xì)胞盒內(nèi)。

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